Cromatografia de columnes clàssiques
2. columna cromatogràfica (tipus de rotació)
3. columna cromatogràfica (manual)
*** Llista de preus per a sencers, pregunteu -nos per obtenir -ho
Descripció
Paràmetres tècnics
Cromatografia de columnes clàssiquesés una tècnica de separació fonamental que s’utilitza àmpliament en la química i la bioquímica per purificar i aïllar components de les barreges . que funciona amb el principi de particions diferencials de substàncies entre una fase estacionària embalada dins d’una columna i una fase mòbil que flueix a través d’ella .
La fase estacionària, normalment un adsorbent sòlid com el gel de sílice o alumina, s’envasa estretament en una columna de vidre o plàstic . La barreja d’exemple s’introdueix a la part superior de la columna, seguida de l’addició de la fase mòbil un dissolvent o la barreja de dissolvents {{2} Basat en les seves propietats químiques, com la polaritat, la mida i l’afinitat per l’adsorbent .
Els compostos amb interaccions més fortes amb la fase estacionària es mouen més lentament a través de la columna, mentre que els que tenen interaccions més febles viatgen més ràpidament . Aquesta migració diferencial dóna lloc a la separació de la barreja en bandes o fraccions diferents, que es poden recollir individualment .
Es valora per la seva simplicitat, versatilitat i rendibilitat . És adequada tant per a separacions a escala analítica, per identificar i quantificar components, com per a separacions a escala preparativa, per obtenir quantitats més grans de substàncies purificades Per a una àmplia gamma d'aplicacions .
Paràmetres
Principis bàsics
|
|
Cromatografia de columnes clàssiques, també coneguda com a cromatografia líquida-sòlida, és una tècnica per separar els soluts basats en la diferència de distribució entre una fase estacionària (normalment un adsorbent sòlid) i una fase mòbil (dissolvent) . es pot resumir el principi bàsic Els diferents coeficients de distribució entre la fase fixa i la fase mòbil . En la cromatografia de columnes, la fase estacionària sol estar composta per matèria de partícules poroses (com ara gel de sílice, alumina, carboni activat, etc .), que té una gran superfície específica i un centre d’adsorció, i pot formar enllaços d’hidrogen amb molècules de solut, van der Waals forces i altres interaccions, cosa que produeix l’adsorció.}}}} és responsable en la fase mòbil de la fase mòbil.}} Elució de molècules de solut de la fase estacionària i la seva selecció s'ha de determinar segons la polaritat del solut i les característiques d'adsorció de l'adsorbent . En el procés de separació, la solució de barreja s’introdueix a la columna que conté la fase estacionària . amb el flux de la fase mòbil, els components es mouen cap avall a la columna a diferents velocitats a causa de la diferent capacitat d’adsorció de la fase estacionària . Els components més polars solen ser fàcils d’adsorbir per la fase estacionària, de manera que es mouen lentament .} Amb la polaritat feble es pot emportar fàcilment per la fase mòbil i la velocitat de moviment és més ràpida . D’aquesta manera, cada component forma diverses bandes de colors a la columna per aconseguir la separació . |
Anàlisi d'aminoàcids
L’anàlisi d’aminoàcids es realitza generalment mitjançant cromatografia líquida, de les qualsCromatografia de columnes clàssiquesés una tècnica d'ús comú . En aquest mètode, la resina d'intercanvi d'ions s'utilitza com a fase estacionària per separar els aminoàcids segons la diferència de càrrega elèctrica . pot haver de convertir -se en una forma més detectable per derivatització abans que la mostra entra a la columna . Columna cromatogràfica .
- Preparació de la mostra: la mostra de proteïna està hidrolitzada a aminoàcids . Això es pot aconseguir mitjançant hidròlisi àcida o hidròlisi enzimàtica . La mostra hidrolitzada necessita patir un pretractament adequat, com ara l'eliminació de residus de proteïnes .
- Derivatització: Per millorar la sensibilitat de les característiques de detecció i selecció de la separació de l’anàlisi d’aminoàcids, la derivatització d’aminoàcids és sovint necessària . Hi ha dos tipus de derivacions d’aminoàcid clorofluorè de metil (fmoc-ci), fenil isotiocianat (PITC), clorur de dansil (dansyl-ci), 2, 4- dinitrofluorobenzene (fdnb), etc .
- Selecció de la columna: seleccioneu la columna adequada per a l’anàlisi d’aminoàcids, com ara la columna d’intercanvi d’ions, columna C18, columna C8, etc .
- Configuració de la condició cromatogràfica: configureu les condicions cromatogràfiques adequades, incloses la fase mòbil, el cabal, el programa de gradient, etc . Les fases mòbils comunes inclouen buffers que contenen parells d’ions, com ara buffers formats .
- Anàlisi de la mostra: la mostra després de la hidròlisi i la derivatització s’injecta al cromatògraf per a l’anàlisi . Si es compara l’àrea màxima i la concentració de cada aminoàcid a la mostra de la corba estàndard, el contingut d’aminoàcids de la mostra es pot analitzar quantitativament .
- Processament de dades: segons l’àrea màxima i les dades de concentració obtingudes a partir de l’anàlisi, es calcula el contingut de cada aminoàcid de la mostra i es processa les dades i es reporta el resultat .
Hi ha molts exemples d’aplicació en l’anàlisi d’aminoàcids i es mostren diversos casos específics a continuació:
- Detecció d'aminoàcids essencials: l'ús pot detectar el contingut d'aminoàcids essencials, com la isoleucina, la leucina, la lisina, etc. . Aquests aminoàcids tenen un paper vital en el cos humà i són importants per mantenir l'activitat vital i la salut .
- Determinació d’aminoàcids en medicina xinesa: En l’anàlisi de la medicina xinesa, també s’utilitza àmpliament per determinar el contingut d’aminoàcids en la medicina xinesa . per exemple, quan es determina el contingut de paeoniflorina en les pastilles de baifeng de wuji aminoàcids .
- Determinació dels aminoàcids en aliments: El contingut d'aminoàcids en aliments és també una de les àrees d'aplicació importants . Per exemple, en la determinació de nucleòtids en aliments infantils i productes lactis, cinc nucleòtids en pols de llet es poden aïllar i determinar utilitzant un C 18- T revertit columna o una columna amb un rendiment equivalent {{3} S'utilitza per determinar el contingut d'aminoàcids en altres aliments, que proporciona una base important per al control de qualitat dels aliments i l'avaluació de la nutrició .
En l'anàlisi d'aminoàcids, és necessari seleccionar reactius de derivatització adequats i condicions de derivatització per millorar la sensibilitat i la precisió de la detecció .
L’elecció de la columna i la configuració de les condicions cromatogràfiques tenen un impacte important en l’efecte de separació i cal optimitzar -se segons la mostra específica i les necessitats analítiques .
En el procés d’anàlisi, cal parar atenció a les condicions de preparació i emmagatzematge de les mostres per evitar la influència de la contaminació i la degradació de la mostra en els resultats de l’anàlisi .
Què és el tractament derivat
La derivatització és una important tècnica de pretractament de mostres aCromatografia de columnes clàssiques, que pretén millorar el rendiment de detecció i l'efecte de separació dels analits . A continuació, es mostra una explicació detallada del procés de derivatització:
|
► Finalitat del tractament derivat 1) Rendiment de detecció millorat: introduint grups funcionals fàcils de detectar, l'analit genera un senyal més fort al detector, millorant la sensibilitat i la precisió de la detecció . |
|
|
|
► El tipus de tractament derivat 1) Derivació pre-columna: |
|
La derivació post-columna té els avantatges de la bona reproductibilitat i els factors menys influents, però requereix instruments i equips addicionals . 1) Sensibilitat de detecció millorada: per exemple, en l’anàlisi d’aminoàcids, la introducció de grups funcionals fàcilment detectables (com els fluoròfors) mitjançant la derivatització pre-columna pot augmentar la intensitat del senyal d’aminoàcids al detector, millorant així la sensibilitat de la detecció . |
|
Cromatografia de columnes clàssiques, Una tècnica fonamental en la ciència de la separació, continua evolucionant amb els avenços en materials i metodologia, garantint la seva rellevància tant en aplicacions de recerca com industrials .
Una de les orientacions prometedores és la integració de noves fases estacionàries . Les innovacions en la ciència del material han provocat el desenvolupament de materials d’embalatge d’alt rendiment amb selectivitat millorada, estabilitat i eficiència . Aquests materials
A més, s'està combinant cada cop més amb tècniques de detecció avançades, com l'espectrometria de masses, per millorar la sensibilitat i la precisió . Aquesta hibridació permet una anàlisi més completa de les barreges complexes, ampliant l'aplicabilitat de la tècnica en camps com la metabolomica i la proteïna .
En conclusió, el futur rau en la seva adaptació a nous materials, miniaturització i integració amb mètodes de detecció d’avantguarda, garantint la seva utilitat continuada en paisatges científics i industrials moderns .
Etiquetes populars: Cromatografia de columnes clàssiques, fabricants de cromatografia de columnes clàssiques de la Xina, proveïdors, fàbrica
Un parell de
Cromatografia de columnes convencionalsEnviar la consulta
