Cromatografia en columna HPLC
2. ColumnaCromatogràfica (tipus de rotació)
3. Columna Cromatogràfica (Manual)
*** Llista de preus per a sencers, pregunteu -nos per obtenir -ho
Descripció
Paràmetres tècnics
Cromatografia en columna HPLC, també coneguda com a cromatografia líquida d’alt rendiment (cromatografia líquida d’alt rendiment), és una cromatografia líquida de columnes amb alta eficiència de separació i també és una branca important de la cromatografia.
Separa els components de la mostra segons la diferència en la força d’adsorció i el coeficient de partició entre la fase fixa i la fase mòbil. Un sistema d’infusió d’alta pressió, una fase mòbil (normalment un solvent o una barreja de dissolvents amb diferents polaritats) es bombeja en una columna que conté una fase estacionària. Quan cada component de la mostra passa per la columna de cromatograma, a causa de la diferent mida i la força de la interacció amb la fase estacionària (com ara adsorció, distribució, exclusió, afinitat), el temps de residència en fase estacionària també és diferent, de manera que aconsegueix la separació de cada component. Els components separats entren al detector per a la detecció, obtenint així informació qualitativa i quantitativa de cada component.
Paràmetre
Aplicacions en anàlisi farmacèutica
Aplicació de la cromatografia de columnes HPLC en anàlisi de fàrmacs
Com a important tecnologia d’anàlisi de separació, la cromatografia líquida d’alt rendiment (HPLC) ha mostrat un gran potencial d’aplicació i valor en el camp de l’anàlisi farmacèutica des del seu ràpid desenvolupament a la dècada de 1970. Combinant els principis de separació de la cromatografia líquida clàssica i la cromatografia de gas, HPLC s’ha convertit en una eina indispensable en l’anàlisi de fàrmacs per a la seva separació eficient, anàlisi ràpida, excel·lent sensibilitat a la detecció i àmplia gamma d’aplicacions.
Principis i característiques bàsiques
Utilitza la interacció de les fases fixes i mòbils per separar gradualment els diferents components de la barreja. La fase estacionària pot ser un sòlid o un líquid connectat a un sòlid, mentre que la fase mòbil és un líquid o un gas. A HPLC, el dissolvent es veu obligat a través de la columna a altes pressions de fins a centenars d’atmosferes, millorant molt l’eficiència de separació. Segons el diferent mecanisme de separació, HPLC es pot dividir en HPLC de fase normal, HPLC de fase inversa, intercanvi d’ions HPLC i exclusió de volum HPLC. Cada tipus té el seu àmbit d'aplicació específic i el mecanisme de separació, com ara HPLC de fase normal per separar els analits basats en la polaritat, i la fase inversa HPLC per separar -se mitjançant interaccions hidrofòbiques.
Les característiques de la cromatografia en columna HPLC es reflecteixen principalment en els aspectes següents:
Eficiència d’alta separació: HPLC permet una separació eficient de barreges complexes gràcies a les bombes d’infusió d’alta pressió i columnes d’alt rendiment.
Alta sensibilitat: detectors moderns, com ara detectors d’absorció ultraviolats, detectors de fluorescència, detectors d’espectrometria de masses, etc., fan que HPLC tingui una sensibilitat de detecció extremadament elevada.
Ampli ventall d’aplicacions: HPLC no està limitat per la volatilitat i l’estabilitat tèrmica de la mostra i pot analitzar substàncies actives fisiològiques inestables tèrmiques amb un punt d’ebullició elevat i no fàcil de vaporitzar.
Grau alt d’automatització: la majoria d’instruments HPLC moderns estan equipats amb mostrejadors automàtics i processador de dades, cosa que pot realitzar l’automatització d’anàlisi i el processament ràpid de dades.
 |
 |
 |
 |
Aplicació específica en anàlisi de fàrmacs
L’HPLC es pot utilitzar per a l’anàlisi de la composició de fàrmacs per determinar els ingredients actius i les impureses nocives dels fàrmacs. Per exemple, mitjançant l’anàlisi de flavonoides, alcaloides i altres ingredients actius en materials medicinals xinesos, es poden determinar els tipus i contingut d’ingredients actius per assegurar la qualitat i l’eficàcia dels fàrmacs. A més, HPLC també es pot utilitzar per a l’anàlisi de la composició de fàrmacs en formes de dosificació farmacèutica occidental, com ara injeccions, comprimits, càpsules, etc., per assegurar -se que la composició del medicament en el medicament compleix els requisits especificats.
HPLC té un paper important en la determinació de la concentració de fàrmacs. En determinar precisament el contingut de medicaments en un medicament, es pot assegurar la seguretat i l'efectivitat del fàrmac. Per exemple, en l’anàlisi de fàrmacs antibiòtics, es pot utilitzar HPLC per determinar el contingut d’antibiòtics del fàrmac per avaluar l’efecte antibacterià del fàrmac. A més, HPLC també es pot utilitzar per determinar la concentració de fàrmacs en organismes, com ara plasma, orina, teixit i altres mostres biològiques, per avaluar l’eficàcia i les reaccions adverses dels fàrmacs.
HPLC també té un paper important en l’avaluació de la qualitat dels medicaments. Si comparem les dades analítiques de diferents lots de fàrmacs, és possible avaluar si la qualitat dels fàrmacs és estable. A més, HPLC també es pot utilitzar per estudiar l’eficàcia i les característiques farmacocinètiques dels nous medicaments, proporcionant una base científica per al desenvolupament i la comercialització de nous medicaments. Per exemple, en l’etapa del desenvolupament de nous medicaments, l’absorció, la distribució, el metabolisme i l’excreció de nous fàrmacs en animals es poden determinar per HPLC, per comprendre l’eficàcia i les característiques farmacocinètiques dels nous medicaments i proporcionar un fort suport als assaigs clínics i a les aplicacions de màrqueting de nous medicaments.
Els fàrmacs quirals fan referència a molècules de fàrmacs amb centres quirals, i els seus enantiòmers poden variar significativament en l’activitat vivo, el metabolisme i la toxicitat. Per tant, té una gran importància aïllar i determinar els enantiòmers dels fàrmacs quirals. Aquesta cromatografia té un paper important en l’anàlisi de fàrmacs quirals. En introduir l'additiu de fase mòbil quiral o en fase mòbil quiral, els enantiòmers de fàrmacs quirals es poden separar i determinar eficaçment. Per exemple, per a fàrmacs d’aminoàcids òpticament actius, aquesta cromatografia pot ser separada i determinada diferents enantiòmers per avaluar l’activitat biològica i la toxicitat del fàrmac.
Els medicaments naturals provenen d’una àmplia gamma de fonts amb composicions complexes i poden contenir una varietat de compostos bioactius. La cromatografia de la columna té un paper important en l’anàlisi de fàrmacs naturals. Optimitzant les condicions cromatogràfiques i la selecció de fases mòbils adequades, es pot realitzar una separació i determinació eficient dels components actius en medicaments naturals. Per exemple, aquest mètode de cromatografia es va utilitzar per separar i determinar els components actius de la medicina d’herbes xineses, com els flavonoides i les saponines, per comprendre els seus tipus i contingut i per proporcionar un fort suport per al control, el desenvolupament i la utilització de la medicina herbal xinesa.
Avantatges i reptes de la cromatografia de columnes HPLC en l’anàlisi de fàrmacs
El mètode cromatogràfic té els avantatges de l’alta eficiència de separació, alta sensibilitat, ampli rang d’aplicacions i alt grau d’automatització en l’anàlisi de fàrmacs. Tanmateix, en aplicació pràctica, també s’enfronta a alguns reptes. Per exemple, el pretractament de la mostra és molt exigent per assegurar la puresa i l'estabilitat de la mostra; Costos analítics elevats, inclosos l’adquisició d’instruments, el manteniment, el consum cromatogràfic i la fase mòbil; A més, per a alguns components amb polaritat forta o pes molecular gran, és possible que HPLC no pugui separar -se completament ni detectar malament. Per tant, en aplicacions pràctiques, el mètode d’anàlisi més adequat s’ha de seleccionar segons els requisits de qualitat dels medicaments específics i la situació real.
Perspectives futures
Amb el progrés de la ciència i la tecnologia i el desenvolupament de la tecnologia de cromatografia líquida d’alt rendiment, la seva aplicació en l’anàlisi de fàrmacs serà més àmplia. D’una banda, el desenvolupament de nous materials estacionaris ampliarà molt el rang d’aplicacions de cromatografia líquida d’alt rendiment i millorarà l’eficiència i la selectivitat de la separació. D'altra banda, els instruments HPLC seran més intel·ligents i automatitzats, supervisant l'estat de la columna en temps real mitjançant sensors integrats, permetent un manteniment predictiu, reduint el temps d'aturada i optimitzant processos experimentals. A més, combinat amb la tecnologia d’anàlisi de dades grans, el sistema pot ajustar automàticament els paràmetres de funcionament per coincidir amb les millors condicions de separació de diferents mostres, millorant l’eficiència i la fiabilitat experimentals dels resultats. Aquests avenços proporcionaran eines analítiques més eficients, precises i fiables per a l’anàlisi de fàrmacs, impulsant el desenvolupament del descobriment de fàrmacs i el control de qualitat.
En resum, aquest tipus de cromatografia té un paper important en l’anàlisi de fàrmacs i té àmplies perspectives d’aplicació. Optimitzant contínuament les condicions cromatogràfiques, la selecció de fases mòbils i estacionàries adequades, introduint noves tecnologies i equips de detecció, millorant encara més la seva precisió i fiabilitat en l’anàlisi de fàrmacs i proporcionant un suport més potent per al desenvolupament de fàrmacs, el control de qualitat i el consum clínic de fàrmacs.
Mèrits i demèrits
Avantatge
Separació eficient
La cromatografia en columna HPLC utilitza una bomba d’infusió d’alta pressió i fase estacionària d’alta eficiència, cosa que fa que l’eficiència de la columna sigui molt superior a la cromatografia clàssica de líquids i pot realitzar una separació eficient de barreges complexes.
Alta sensibilitat
Equipats amb detectors d’alta sensibilitat, com detectors d’ultraviolats, detectors de fluorescència, etc., poden detectar concentracions baixes de mostres, que és particularment important per a l’anàlisi de traça.
Àmpliament utilitzat
No es limita a la volatilitat i a l’estabilitat tèrmica de la mostra i pot analitzar la matèria orgànica amb un punt d’ebullició elevat, una mala estabilitat tèrmica i una gran massa molecular relativa i té una àmplia gamma d’aplicacions.
Bona selecció
Hi ha molts tipus de fase mòbil i es pot millorar la selectivitat de la separació canviant el tipus i la composició de la fase mòbil per complir els requisits analítics de diferents mostres.
Alt grau d’automatització
La majoria dels instruments HPLC moderns estan equipats amb mostrejadors automàtics i processador de dades, cosa que pot realitzar l’automatització de l’anàlisi i millorar l’eficiència de l’anàlisi.
La recuperació de mostres és fàcil
La mostra no es destrueix després de passar per la columna i es pot recollir o preparar un sol component, cosa que és convenient per a experiments o aplicacions posteriors.
Manca
El preu i els costos de manteniment diaris dels cromatògrafs líquids són elevats, incloent la substitució de columnes, el consum de fase mòbil i la calibració regular de l’instrument.
Tot i que més ràpidament que la cromatografia líquida clàssica, els temps d’anàlisi HPLC són encara relativament llargs en comparació amb la cromatografia de gas, especialment per a la separació i l’anàlisi de mostres complexes.
Tot i que els instruments HPLC estan molt automatitzats, el funcionament i el manteniment dels instruments encara requereixen un cert nivell d’experiència i experiència. A més, es pot complicar el pre-processament de mostres.
A causa de l'adsorció irreversible d'alguns compostos en la fase estacionària, és possible que aquests compostos no es detectin eficaçment, afectant així la precisió de l'anàlisi.
La separació de LC sovint està molt influenciada per la temperatura de la columna i cal mantenir les condicions de temperatura consistents per obtenir resultats repetibles, cosa que augmenta la complexitat i el cost de l’experiment.
Precaucions en la determinació del contingut de drogues
 |
 |
 |
Aquest mètode té moltes precaucions per a la determinació del contingut de fàrmacs, que és molt important per assegurar la precisió i la fiabilitat dels resultats de la determinació. A continuació, es mostren algunes consideracions clau:
La diferència de la columna afectarà el comportament de retenció del fàrmac, fins i tot si la longitud de la columna, el diàmetre interior, la mida de les partícules de la mateixa columna, a causa de les diferents propietats del farciment, el temps de retenció i el tipus màxim del fàrmac poden ser molt diferents. Per tant, la columna adequada ha de ser seleccionada segons les propietats del fàrmac i les necessitats de separació.
La columna s’ha de mantenir regularment per evitar la contaminació i el bloqueig per assegurar el seu bon rendiment de separació.
El pH de sal tampó de la fase mòbil té un efecte significatiu en el comportament de retenció dels fàrmacs i fins i tot pot canviar l’ordre màxim d’alguns fàrmacs. Per tant, a l’hora d’optimitzar la fase mòbil, s’ha de prestar una atenció especial al valor de pH de la sal tampó.
La composició de la fase mòbil també afecta l'efecte de separació del fàrmac. Per exemple, en la determinació de les preparacions multivitamíniques, els canvis en la proporció relativa de hexanesulfonat de sodi i sulfonat d’heptà de sodi en fase mòbil afectaran el temps de retenció i la forma màxima de cada component. Per tant, la composició de fase mòbil adequada s’ha de seleccionar segons la naturalesa del fàrmac i les necessitats analítiques.
El procés de manipulació de mostres ha d’assegurar la representativitat i l’estabilitat de la mostra per evitar la degradació o la contaminació de la mostra durant el processament.
En pesar la mostra, el mètode additiu s’hauria d’utilitzar per pesar -lo al seu lloc alhora per assegurar la precisió del pesat. Al mateix temps, s’ha de estandarditzar l’operació de pesatge per evitar fuites.
La qualitat de la substància de referència té una influència directa en el resultat de la determinació del contingut. Per tant, s'ha de seleccionar la qualitat de contingut fiable i precís.
Els productes de control s’han d’emmagatzemar segons sigui necessari per evitar la degradació o la contaminació. Si el producte de control es manté a la nevera, s’ha d’escalfar al forn d’assecat abans de pesar.
El tipus de detector adequat s’ha de seleccionar segons la naturalesa del fàrmac i les necessitats analítiques, com ara el detector ultraviolat, el detector de fluorescència, etc.
El detector s’ha de calibrar periòdicament per assegurar la precisió dels resultats de la seva mesura.
Anàlisi estadística raonable de les dades de mesurament per assegurar la fiabilitat i la repetibilitat dels resultats. Per exemple, es pot calcular la desviació estàndard relativa (RSD) de l’àrea màxima per avaluar la precisió dels resultats de la mesura.
Quan es calcula el contingut, s’han d’utilitzar mètodes fiables com els estàndards externs o interns i s’hauria d’assegurar la linealitat de la corba estàndard.
A l’hora d’establir un nou mètode de determinació del contingut, s’ha de realitzar una verificació metodològica, inclosa l’especificitat, la linealitat, el rang, la precisió, la precisió, la durabilitat, etc.
La verificació metodològica és un mitjà important per assegurar que el mètode de mesura sigui científic, raonable i fiable.
Assegureu-vos que l'instrument es mantingui estable durant el procés d'anàlisi, sobretot quan realitzeu una anàlisi multi-pin, fixeu-vos en l'atenció per observar si el valor de resposta i la forma màxima de l'instrument són estables.
Si es produeixen dades anormals durant el procés d’anàlisi, s’hauria de comprovar i eliminar detingudament i tornar a analitzar si cal.
Etiquetes populars: Cromatografia en columna HPLC, Fabricants de cromatografia de columnes HPLC Xina, proveïdors, fàbrica
Un parell de
Columna de cromatografia industrialEnviar la consulta
